1. 電化學(xué)發(fā)光原理

電化學(xué)發(fā)光免疫分析包括了電化學(xué)反應(yīng)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過(guò)程。二價(jià)的三聯(lián)吡啶釕Ru（bpy）32+作為標(biāo)記物，有標(biāo)記物的生物分子與配體發(fā)生特異的結(jié)合反應(yīng)后，進(jìn)入流動(dòng)測(cè)量室，此時(shí)電發(fā)光過(guò)程被啟動(dòng)。

電化學(xué)反應(yīng)過(guò)程：

在一定的電壓作用下，Ru（bpy）32+釋放電子成為Ru（bpy）33+。

同時(shí)，電極表面的三丙胺（TPA）也釋放電子成為陽(yáng)離子自由基TPA+，并迅速自發(fā)脫去一個(gè)質(zhì)子而形成三丙胺自由基TPA·。

化學(xué)發(fā)光過(guò)程：

具有強(qiáng)氧化性的Ru（bpy）33+和具有強(qiáng)還原性的三丙胺自由基TPA·發(fā)生氧化還原反應(yīng)，結(jié)果使Ru（bpy）33+還原成激發(fā)態(tài)的Ru（bpy）32+*。

激發(fā)態(tài)的Ru（bpy）32+*以熒光機(jī)制衰變并以釋放出一個(gè)波長(zhǎng)為620nm光子的方式釋放能量，而成為基態(tài)的Ru（bpy）32+。

循環(huán)過(guò)程：

上述化學(xué)發(fā)光過(guò)程后，反應(yīng)體系中仍存在二價(jià)的Ru（bpy）32+和三丙胺（TPA），使得電極表面的電化學(xué)反應(yīng)和化學(xué)發(fā)光過(guò)程可以繼續(xù)進(jìn)行，這樣，整個(gè)反應(yīng)過(guò)程可以循環(huán)進(jìn)行。

通過(guò)上述的循環(huán)過(guò)程，測(cè)定信號(hào)不斷地放大，從而使檢測(cè)靈敏度大大提高。

2. 電化學(xué)發(fā)光免疫原理

上述的電化學(xué)發(fā)光過(guò)程產(chǎn)生的光信號(hào)的強(qiáng)度與二價(jià)的Ru（bpy）32+的濃度成線性關(guān)系。將Ru（bpy）32+與免疫反應(yīng)體系中的一種物質(zhì)結(jié)合，經(jīng)免疫反應(yīng)、分離后，檢測(cè)免疫反應(yīng)體系中剩余二價(jià)的Ru（bpy）32+經(jīng)上述過(guò)程后所發(fā)出的光，即可得知待檢物的濃度。

3. 免疫反應(yīng)過(guò)程

抗原抗體反應(yīng)：

ECLIA中的抗原抗體反應(yīng)類型與酶發(fā)光免疫測(cè)定技術(shù)一致，主要也有雙抗體夾心法、雙抗原夾心法和固相抗原競(jìng)爭(zhēng)法三種模式。

以臨床上常用的HBsAb的含量測(cè)定為例，采用雙抗體夾心法：生物素標(biāo)記的HBsAg, 三聯(lián)吡啶釕絡(luò)合物標(biāo)記的HBsAg與待測(cè)樣品共同孵育，形成三聯(lián)吡啶釕-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素的復(fù)合體；和親和素標(biāo)記的磁微粒孵育，形成三聯(lián)吡啶釕-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素-親和素磁微粒復(fù)合體。

B和F分離：

常用磁顆粒分離技術(shù)。蠕動(dòng)泵將反應(yīng)液吸入流動(dòng)室，磁微粒由磁鐵吸附到電極表面。

電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)與結(jié)果計(jì)算：

蠕動(dòng)泵加入含三丙胺（TPA）的緩沖液，同時(shí)電極加電壓，啟動(dòng)ECL反應(yīng)過(guò)程。該過(guò)程在電極表面周而復(fù)始地進(jìn)行，產(chǎn)生許多光子，由光電倍增管檢測(cè)光強(qiáng)度，光強(qiáng)度與Ru（bpy）32+的濃度呈線性關(guān)系，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出待測(cè)抗原的含量。

最后，終止電壓，移開(kāi)磁珠，加入清洗液沖洗流動(dòng)測(cè)量室，準(zhǔn)備下一個(gè)樣品測(cè)定。